慧穎提供CAL-51細胞CAL-51細胞，中文名稱：人乳腺癌細胞，來源：美國DSMZ，活力好，狀態好，復蘇周期1-2周，*！

General information

Cell line:  CAL-51細胞

Species:  human (Homo sapiens)

Cell type:  breast carcinoma

Origin:  established from the pleural effusion metastasis of a 45-year-old woman with

progressive breast adenocarcinoma (after radio-, chemotherapy and surgery) in

1985; rare example of tumor cell line with normal karyotype

Reference(s):  14563

Biosafety level:  1

Permissions and A

restrictions:

Cell Culture Data

Morphology:  epithelial-like adherent cells growing in monolayers; the culture contains

usually a large amount of cell debris; image; image

Medium:  80% Dulbecco's MEM (4.5 g/L glucose) + 20% h.i. FBS

Subculture:  split culture 1:2 once or twice a week using trypsin/EDTA before cells reach

complete confluency; seed out at ca. 3 x 10 6 cells/175 cm 2

Incubation:  at 37 °C with 10% CO2

Doubling time:  >60 hours

Harvest:  cell harvest of ca. 15-20 x 10 6 cells/80 cm 2

Storage:  frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 2.5 x10 6 cells/ampoule

Scientific Data

Mycoplasma:  negative in DAPI, microbiological culture, RNA hybridization assays

Immunology:  cytokeratin  +,  cytokeratin-7  -,  cytokeratin-8  +,  cytokeratin-17  -,

cytokeratin-18 +, cytokeratin-19 +, desmin -, endothel -, EpCAM +, GFAP -,

neurofilament -, vimentin +

Fingerprint:  multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile

Species:  confirmed as human with IEF of AST, LDH, NP

Cytogenetics:  human near-diploid karyotype with 28% tetraploidy - 46<2n>XX, no

consistent abnormality detected - rare example of tumor cell line with normal

karyotype - resembles published karyotype

Viruses:  ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -,

HIV -, HTLV-I/II -, SMRV -

CAL-51細胞CAL-51細胞培養步驟：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

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