人類免疫缺陷病毒1型p24抗原

酶聯免疫試劑盒

【產品名稱】

通用名：人類免疫缺陷病毒1型p24抗原酶聯免疫試劑盒

英文名：ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURE SUPERNATANT

【包裝規格】

96人份/盒。

【預期用途】

本試劑盒用于人類免疫缺陷病毒1型p24抗原（Human Immunodeficiency Virus Type 1 p24 Antigen）的定量檢測，適用于人血清（或血漿）及細胞培養上清液等標本，僅供研究使用。

【檢驗原理】

本產品采用固相酶聯免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）檢測人血清（或血漿）中的游離HIV-1 p24抗原和細胞培養上清液等標本中的HIV-1 p24抗原。本分析方法是基于雙抗體夾心的非競爭性免疫分析。校準品和樣品中HIV-1 p24抗原與固相抗- p24單克隆抗體和生物素標記的抗-p24多克隆抗體通過免疫反應，形成固相抗-p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素復合物；溫育后洗滌，洗去非特異或多余的抗原和多余的生物素標記的抗- p24多克隆抗體；然后加入HRP（Horseradish Peroxidase，辣根過氧化物酶）標記的鏈親和素，形成固相抗- p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素—鏈親和素-HRP復合物；溫育后洗滌，洗去多余的HRP標記的鏈親和素。加入TMB-H₂O₂底物溶液，HRP催化H₂O₂氧化TMB生成藍色的產物（zui大吸收峰655nm），加入終止液終止酶催化反應，生成黃色產物（zui大吸收峰450nm）。其吸光度與校準品和樣品中的HIV-1 p24抗原濃度成正相關。通過劑量－反應曲線可得出樣品中HIV-1 p24抗原濃度。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

試劑盒置2~8℃保存，有效期為12個月。

【適用儀器】

酶標儀、洗板機、恒溫培養箱等。

【樣本要求】

1. 樣本：人血清（或血漿）樣本，和細胞培養上清液等標本。
2. 存放：樣本于2~8℃可儲存2天；樣本長期儲存應放置于-20℃或-20℃以下環境中，且不宜反復凍融5次以上。

【檢驗方法】

1. 試劑配制方法

• HIV-1 p24校準品系列的配制：

取6支離心管，編號A、B、C、D、E和F。管F中取900µL校準品稀釋液，加入100µL HIV-1 p24校準品（200IU/mL，4,000pg/mL），混勻，作1:10稀釋，配制成校準品F（20IU/mL，400pg/mL）；管E中取500µL校準品稀釋液，加入500µL校準品F，混勻，作1:2稀釋，配制成校準品E（10IU/mL，200pg/mL） ；管D中取500µL校準品稀釋液，加入500µL校準品E，混勻，作1:2稀釋，配制成校準品D（5IU/mL，100pg/mL）；管C中取500µL校準品稀釋液，加入500µL校準品D，混勻，作1:2稀釋，配制成校準品C（2.5IU/mL，50pg/mL）；管B中取500µL校準品稀釋液，加入500µL校準品C，混勻，作1:2稀釋，配制成校準品B（1.25IU/mL，25pg/mL）；以校準品稀釋液作為校準品A。共配制成6個濃度的HIV-1 p24校準品系列（A-F）：A  0、B  1.25IU/mL（25pg/mL）、C  2.5IU/mL（50pg/mL）、D  5IU/mL（100pg/mL）、E  10IU/mL（200pg/mL）和 F  20IU/mL（400pg/mL）。配制好的HIV-1 p24校準品系列應保存在2~8°C，于一月內使用。

• 工作濃度洗滌液的配制：

用純水（蒸餾水或去離子水）將濃縮洗滌液稀釋20倍，即為工作濃度洗滌液。工作濃度洗滌液應保存在2~8℃，于一月內使用。

1. 標準操作方法

• 從鋁箔袋中取出所需數量的微孔板條，裝至微孔板架上。設空白對照1孔，HIV-1 p24校準品A、B、C、D、E和F各2孔，其余各孔為待測樣品，建議每個待測樣品均設置2孔；編號標記。向各孔內分別加入25μL的生物素標記抗體（空白對照孔不加），然后再向各孔內分別加入75μL的HIV-1 p24校準品或待測樣品，輕輕振蕩微孔板，使內容物充分混勻。
• 用封板膜將微孔板密封，置37℃溫育60分鐘。
• 棄去微孔板反應孔內液體，每孔（含空白對照孔）加入350μL工作濃度洗滌液，然后將洗滌液棄去。重復洗板共5次，zui后拍干。
• 每孔加 HRP標記鏈親和素100μL（空白對照孔不加），用封板膜將微孔板密封，置37℃溫育30分鐘。
• 棄去微孔板反應孔內液體，每孔（含空白對照孔）加入350μL工作濃度洗滌液，然后將洗滌液棄去。重復洗板共5次，zui后拍干。
• 每孔加底物緩沖液和顯色劑各50μL（含空白對照孔），用封板膜將微孔板密封，置室溫（18~30℃）避光溫育30分鐘。
• 每孔加終止液50μL（含空白對照孔），輕輕振蕩微孔板，使內容物充分混勻。
• 終止反應后1小時內，用酶標儀在450nm波長處，測定各孔吸光度值，參考波長選擇620-700nm。

1. 數據處理

• 求出HIV-1 p24抗原校準品的吸光度平均值。
• 以HIV-1 p24抗原校準品的吸光度平均值為縱軸，以HIV-1 p24校準品的濃度為橫軸，在雙對數坐標圖上作出標準曲線。
• 如果待測樣品試驗了2孔，求出待測樣品的吸光度平均值。
• 將測得的樣品的吸光度值（或吸光度平均值）在上述標準曲線上求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度。也可以通過軟件用zui小二乘法擬合曲線，求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度。

【檢驗結果的解釋】

1. 質量控制：空白對照校準品吸光度值不高于0.050，A點（0pg/mL）吸光度值不高于0.100，F點（400pg/mL）吸光度值不低于1.000。
2. 對于吸光度值超出校準品F點的樣品，可用校準品稀釋液稀釋適宜倍數后再行測定，樣本中HIV-1 p24抗原濃度值為稀釋后測定值×稀釋倍數。

【檢驗方法的局限性】

1. 本品僅適用于研究用途，不用于臨床診斷。
2. 本品僅適用于游離的HIV-1 p24抗原含量的檢測，不能用于總抗原含量的檢測。
3. 樣本pH應保證在5-10之間，過低或過高的pH可能會造成HIV-1 p24抗原的測量值異常。

【產品性能指標】

1. 測定范圍：0~400pg/mL。
2. 分析靈敏度：zui低檢測限不高于5pg/mL。
3. 校準品劑量-反應曲線的線性：線性相關系數R>0.9900。典型校準曲線如下圖
4. 精密性：批內變異系數（Within-Run CV）不高于10%，批間變異系數（Between-Run CV）不高于15%。
5. 特異性：與HIV-1和HIV-2的env蛋白、pol蛋白和gag蛋白中的p17（1型）等無交叉反應。
6. 膽紅素（Bilirubin，20mg/dL）、血紅蛋白（Hemoglobin，500mg/dL）和血脂（Triolein， 3,000mg/dL）對HIV-1 p24抗原的測量值無明顯干擾。
7. 抗凝劑（肝素0.2mg/mL、檸檬酸鈉100mg/mL和EDTA 20mg/mL）對HIV-1 p24抗原的測量值無明顯干擾。

【注意事項】

1. 本品僅適用于研究用途。
2. 試劑盒從冷藏環境中取出，應平衡至室溫（18~30℃）后再使用。未用完的微孔條用自封袋密封保存。
3. 儲存和溫育時應避光進行。
4. 不得直接用手接觸終止液。若不慎接觸則應立即用大量自來水沖洗。
5. 操作應迅速，加樣品時間過長、洗滌后放置太久均可能影響檢測結果的準確性。
6. 每次測定均應做標準曲線。
7. 操作應按說明書嚴格進行。嚴格控制反應溫度和時間，并盡量使用移液器加樣，結果判定以酶標儀讀數為準。
8. 不同批號試劑請勿混用，不要使用過期試劑。
9. 本品含有部分動物源性物質，操作必須符合國家有關傳染性疾病檢測的實驗室管理及安全的規定，并按有關實驗室規程處理所使用組份及樣品。

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【生產企業】

企業名稱：上海慧穎生物科技有限公司

地    址：上海市嘉定區鶴旋路

郵政編碼：201800

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