【產品名稱】：人臍靜脈內皮細胞

【代號】：HUVEC

【規格】：株

【生長特性】貼壁

【培養條件】DMEM 10% 優質FBS

【特惠價格】致電

【復蘇時間】1-2周

【運輸方式】聯邦及順豐

HUVEC人臍靜脈內皮細胞是我公司明星產品之一，已被廣泛用于細胞信號途徑和多種腫瘤發生機制的研究，如以Allcells的人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）作為載體，探究細胞粘著分子-1與靜脈血栓形成的關系，以及利用我們的產品研究血管生成素-4促使惡性膠質瘤發生的機制等。僅供科研，不適用于臨床診斷和治療。

您一旦購入HUVEC細胞株產品，表明您已接受以下條件：

1. 即使現有的血清學檢測結果都是陰性，也會被當做潛在性的污染樣本處理。

2. 能夠建立和遵循恰當的安全控制程序，保證使用這些產品的安全性。

接收提示：

1. 請仔細檢查外包裝是否是破損, 冷凍的產品是否融化；如有異常，請立即。

2. 請將產品放入液氮中保存，請不要放在-80℃冰箱中。

一、復蘇前準備

1． 包被液的配制：用去離水配制 0.5% 明膠溶液，高壓滅菌。

2． 培養瓶的包被：取2-4個T25培養瓶，每個培養瓶加入2－3ml 0.5% 明膠溶液，使包被液均勻的分布在培養瓶底面，置37℃培養箱中，放置（至少放置2小時）。

注意：復蘇和傳代后的細胞都需要接種在0.5% 明膠包被過的培養瓶中，這樣細胞會均勻的分布生長。

二、細胞復蘇和接種

1． 37℃水浴預熱培養液（HUVEC-004）。

2． 從液氮中取出細胞產品管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直到管中只剩下zui后一片結晶（注意：不要讓水沒過產品管）。 用75%的酒精擦拭產品管外壁。

3． 將產品管中的細胞移至15ml無菌離心管中，慢慢逐滴加入預溫的37℃ 基礎培養液（HUVEC-004B）培養液4－5ml混勻，邊加邊搖勻。

4． 用1ml的培養液沖洗產品管，向15ml離心管中加入沖洗的細胞懸液，邊滴加邊搖勻。

5． 取10μl細胞懸液和10μl臺盼藍混勻后，取10μl計數。 這一步驟非常重要，能確定您收到的產品是否合格（詳見如何計數復蘇的細胞）

6． 細胞懸液在1500rpm，室溫條件下，離心10分鐘，去除上清。

7． 加HUVEC*培養液4－5ml, 輕輕混勻細胞，備用。

8． 接種前將 T25培養瓶中的包被液吸去，按2500－5000個細胞/cm2接種細胞。

9． 每個培養瓶中加*培養液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃、5%CO2 培養箱內培養。

三、細胞換液和培養

注意：復蘇或傳代后的細胞，請于24小時后，*次更換培養液

1． 復蘇后的細胞經37℃、5%CO2 培養箱內培養24小時，此時細胞已*貼壁，更換培養液后，請

繼續在37℃5％CO2培養箱內培養。

2． 之后，每2-3天更換培養液1次，至細胞長至覆蓋培養面的 70-80% 可進行傳代或凍存。

3． 換液前，請將培養液從4℃中取出，使其恢復到室溫。

四、消化細胞

1．消化液的配制：用pH7.0-7.2的，分別配制0.5%胰酶液和0.04%EDTA-Na2液，

用前按1：1混合。在細胞傳代或凍存前先消化細胞。

將PBS或D-Hank’S液, 消化液，含10% FBS的 基礎培養液回復到室溫。

2．具體操作如下：

（1）吸去培養液，加入3ml PBS或D-Hank’S液，使PBS或D-Hank’S液均勻的分布在培養瓶細胞表面。之后，吸去PBS或D-Hank’S液。

（2）每個T25培養瓶加入消化液 2ml，使消化液均勻的分布在培養瓶細胞面。

（3）37℃消化2-5分鐘，在顯微鏡下看細胞回縮成圓形后，輕輕震動使絕大部細胞脫落。

（4）向每個培養瓶中加 3-5ml 含10% FBS的 基礎培養液（HUVEC-004B）液 中和胰酶的消化作用。

（5）用吸管輕輕吹打培養面使細胞*脫落后，吸至15ml無菌離心管內。

（6）20℃，1500rpm離心5 分鐘，棄上清。

（7）加入一定培養液，調整細胞數量后，抽樣加入胎盤藍計數，得到細胞數和活性后，按細胞數傳代或凍存。

五、細胞傳代

1． 消化細胞（詳見第四步）。

2． 按2500－5000個細胞/cm2接種細胞于T25的培養瓶中（包被過0.5%明膠）。

3． 每個培養瓶中加*培養液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃，5%CO2 培養箱內培養。

六、細胞凍存

1．消化細胞（詳見第四步）。

2．調整細胞數2-5×105個/ml，按含細胞的基礎培養液（HUVEC-004B）液ml數，配制等量的冷凍保護劑。

3．冷凍保護劑的配制：FBS占80％，DMSO占20％

4．將細胞懸液于冰浴中，逐滴加入冷凍保護劑，邊滴加邊搖動，加完后用輕輕吹打混勻。

5．在冰浴中，將細胞分裝于凍存管中，1.8ml/管。

6．將凍存管置于凍存盒內，放入-80℃冰箱中，24小時后轉入液氮中保存。

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