NRK-49F 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

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產(chǎn)品名稱(chēng)：NRK-49F 細(xì)胞

中文名稱(chēng)：大鼠腎正常成纖維細(xì)胞

種屬：大鼠

來(lái)源：腎；成纖維細(xì)胞；Osborne-Mende

培養(yǎng)條件：EMEM

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁

NRK-49F 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用簡(jiǎn)介

通過(guò)大規(guī)模體外培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞是生產(chǎn)生物制品的有效方法。20世界60-70年代，就已創(chuàng)立了可用于大規(guī)模培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的微載體培養(yǎng)系統(tǒng)和中空纖維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。近十?dāng)?shù)年來(lái)，由于人類(lèi)對(duì)生長(zhǎng)激素、干擾素、單克隆抗體、疫苗及白細(xì)胞介素等生物制品的需求猛增，以傳統(tǒng)的生物化學(xué)技術(shù)從動(dòng)物組織獲取生物制品已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足這一需求。隨著細(xì)胞培養(yǎng)的原理與方法日臻完善，動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)趨于成熟。

所謂動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)（large-scale culture technology）是指在人工條件下（設(shè)定ph、溫度、溶氧等），在細(xì)胞生物反應(yīng)器（bioreactor）中高密度大量培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞用于生產(chǎn)生物制品的技術(shù)。目前可大規(guī)模培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞有雞胚、豬腎、猴腎、地鼠腎等多種原代細(xì)胞及人二倍體細(xì)胞、cho（中華倉(cāng)鼠卵巢）細(xì)胞、BHK-21(倉(cāng)鼠腎細(xì)胞)、Vero細(xì)胞(非洲綠猴腎傳代細(xì)胞，是貼壁依賴的成纖維細(xì)胞)等，并已成功生產(chǎn)了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅細(xì)胞生成素、單克隆抗體等產(chǎn)品。

在過(guò)去幾十年來(lái)，該技術(shù)經(jīng)有了很大發(fā)展，從使用轉(zhuǎn)瓶(roller bottle) 、CellCube等貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，發(fā)展為生物反應(yīng)器（Bioreactor）進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)。*代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)核心問(wèn)題是難以產(chǎn)業(yè)化或者說(shuō)是規(guī)模化生產(chǎn)：一是在工藝生產(chǎn)時(shí)不能大規(guī)模制備產(chǎn)品；二是非批量生產(chǎn)容易導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量的不均一性；三是難以對(duì)同批生產(chǎn)進(jìn)行生產(chǎn)和質(zhì)量控制。

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，迫切需要大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)，特別是培養(yǎng)表達(dá)特異性蛋白的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，以便獲得大量有用的細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物。采用玻璃瓶靜置或旋轉(zhuǎn)瓶的培養(yǎng)方法，已不能滿足所需細(xì)胞數(shù)量及其分泌產(chǎn)物。因而必須為工業(yè)化生產(chǎn)開(kāi)創(chuàng)一種新的技術(shù)方法。自70年代以來(lái)，細(xì)胞培養(yǎng)用生物反應(yīng)器有很大的發(fā)展，種類(lèi)越來(lái)越多，規(guī)模越來(lái)越大，較常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器有空氣提升反應(yīng)器，中空纖維管反應(yīng)器，無(wú)泡攪拌反應(yīng)器及籃式生物反應(yīng)器等。八十年代以來(lái)，人們逐漸開(kāi)始以生物反應(yīng)器培養(yǎng)代替鼠腹水的方法獲得單克隆抗體。

動(dòng)物細(xì)胞是一種無(wú)細(xì)胞壁的真核細(xì)胞，生長(zhǎng)緩慢，對(duì)培養(yǎng)環(huán)境十分敏感。采用傳統(tǒng)的生物化工技術(shù)進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞大量培養(yǎng)，除了要滿足培養(yǎng)過(guò)程必需的營(yíng)養(yǎng)要求外，有必要建立合理的控制模型，進(jìn)行pH和溶氧（DO）的*控制。細(xì)胞生物反應(yīng)器可通過(guò)微機(jī)有序地定量地控制加入動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)罐內(nèi)的空氣、氧氣、氮?dú)夂投趸妓姆N氣體的流量，使其保持*的比例來(lái)控制細(xì)胞培養(yǎng)液中的pH值和溶氧水平，使系統(tǒng)始終處于*狀態(tài)，以滿足動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)對(duì)pH值和溶解氧的需要。如為提高或達(dá)到一定的溶氧水平可改變通入培養(yǎng)罐內(nèi)氣體中氧氣和氮?dú)獾谋壤齺?lái)實(shí)現(xiàn)控制DO值的目的。采用二氧化碳/碳酸氫鈉（CO2/NaHCO3）緩沖液系統(tǒng)來(lái)控制培養(yǎng)液的pH值是一種較好的方法。

NRK-49F 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

Farage      人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞         人     彌漫大B淋巴瘤；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；女性         1640         懸浮

OCI-LY3    人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞         人     彌漫大B淋巴瘤；男性         1640         懸浮

3D4/21      豬肺泡巨噬細(xì)胞     豬     肺泡巨噬細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；Landrace          DMEM     貼壁

HEEpiC     人食管上皮細(xì)胞     人     食管；上皮細(xì)胞     1640         貼壁

CP70         人卵巢癌細(xì)胞         人     卵巢癌；女性         1640         貼壁

KYSE450   人食管癌細(xì)胞         人     食管鱗癌；男性     EMEM      貼壁

BNL1MEA.7R.1        小鼠肝上皮細(xì)胞     小鼠         肝；上皮細(xì)胞         1640         貼壁

HCC-78    人肺腺癌細(xì)胞        人     肺腺癌；男性         EMEM      貼壁

SHEE         永生化食管上皮細(xì)胞     人     食管；上皮細(xì)胞     1640         貼壁

ECV304    人臍靜脈內(nèi)皮（膀胱癌）細(xì)胞     人     膀胱癌     1640         貼壁

HM  人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞         人     小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞     DMEM     貼壁

CTV-1        人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞     人     急性T淋巴細(xì)胞白血病；男性     1640         懸浮

GDM-1     人急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞     人     急性粒細(xì)胞白血病；女性     IMDM      懸浮

DOhh2      人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞         人     人彌漫大B淋巴瘤；男性     1640         懸浮

HBE 人支氣管上皮細(xì)胞         人     支氣管；上皮細(xì)胞         DMEM     貼壁

LADMAC  小鼠骨髓淋巴細(xì)胞         人     骨髓淋巴細(xì)胞；C3H      DMEM     懸浮

EOC20      小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞     小鼠         小膠質(zhì)細(xì)胞； C3H/HeJ         DMEM     貼壁

A2058       人黑色素瘤細(xì)胞     人     黑色素瘤；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；男性     DMEM     貼壁

BMSCs     小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞         小鼠         骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞         DMDM     貼壁

HuCCT1   人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞         人     肝內(nèi)膽管癌；男性         DMEM     貼壁

huh28       人膽管癌細(xì)胞         人     肝內(nèi)膽管癌     1640         貼壁

TE354T     人皮膚基底細(xì)胞癌細(xì)胞        人     皮膚基底細(xì)胞癌；女性         DMEM     貼壁

NCI-H820          人乳頭狀肺腺癌細(xì)胞     人     乳頭狀肺腺癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；男性     1640         貼壁

CAOV-3    人卵巢腺癌細(xì)胞     人     卵巢癌；女性         DMEM     貼壁

HSMC       人骨骼肌細(xì)胞         人     骨骼肌     DMEM     貼壁

VSMC       大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞     大鼠         胸主動(dòng)脈平滑肌     DMEM     貼壁

SNU398    人肝癌細(xì)胞     人     肝癌；男性     DMEM     貼壁+懸浮

CCC-HHM-2     人胚心肌組織來(lái)源細(xì)胞         人     心肌         DMEM     貼壁

HCFB        人心肌成纖維細(xì)胞         人     心肌；成纖維細(xì)胞         DMEM     貼壁

CCC-HEH-2       人胚心肌組織來(lái)源細(xì)胞         人     心肌         DMEM     貼壁

MT2 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞     人     T淋巴細(xì)胞白血病 1640         懸浮

HMSC       人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞     人     骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞         McCoy’s    貼壁

HL-1 小鼠心房肌細(xì)胞     小鼠         心肌；SV40轉(zhuǎn)化    DMEM     貼壁

TU212      人喉癌細(xì)胞     人     頭頸鱗癌         1640         貼壁

SNU-C1    人結(jié)腸癌細(xì)胞         人     結(jié)腸癌；男性         1640         貼壁

HSF  人皮膚成纖維細(xì)胞         人     皮膚；成纖維細(xì)胞         DMEM     貼壁

M-20         人胚胎皮膚細(xì)胞     人     黑色素瘤         DMEM     貼壁

HNEpC     人鼻粘膜上皮細(xì)胞         人     鼻粘膜；上皮細(xì)胞         1640         貼壁

HFTF         人胚胎眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞        人     胚胎；眼；成纖維細(xì)胞         DMEM     貼壁

MSC 豬骨髓間質(zhì)干細(xì)胞         豬     骨髓間質(zhì)干細(xì)胞     1640         貼壁

SJSA-1       人骨肉瘤細(xì)胞         人     骨肉瘤；男性         DMEM     貼壁

MC38       小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞     小鼠         結(jié)腸癌；雌性；C57BL/6        1640         貼壁

MeT-    人膜膜間皮細(xì)胞     人     膜膜間皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；男性        DMEM     貼壁

Mousepodocyte       小鼠腎足細(xì)胞         小鼠         腎；足細(xì)胞     DMEM     貼壁

Ratpodocyte    大鼠腎足細(xì)胞         大鼠         腎；足細(xì)胞     DMEM     貼壁

         兔軟骨細(xì)胞     兔     軟骨         DMEM     貼壁

HCM         人心肌細(xì)胞     人   心肌         DMEM     貼壁

SU-DHL-6 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞         人     彌漫大B淋巴瘤；腹腔轉(zhuǎn)移；男性     1640         懸浮

RC-K8       人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞         人     彌漫大B淋巴瘤；腹腔轉(zhuǎn)移；男性     1640         懸浮

NCI-H929          人骨髓瘤細(xì)胞         人     骨髓瘤；女性         IMDM      懸浮

RT-112      人膀胱癌細(xì)胞         人     膀胱癌；女性         1640         貼壁

HCCLM3  人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞         人     肝癌；男性     DMEM     貼壁

SACC-83   涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞     人     涎腺腺樣囊性癌     1640         貼壁

SACC-LM 涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞     人     涎腺腺樣囊性癌     1640         貼壁

Malme-3M       人惡性黑色素瘤細(xì)胞     人     黑色素瘤；肺轉(zhuǎn)移；男性     DMEM     貼壁

HCV-29     人膀胱上皮細(xì)胞     人     膀胱癌；男性         1640         貼壁

McA-RH7777   大鼠肝癌細(xì)胞         大鼠         肝癌；雌性；Buffalo     DMEM     貼壁

HOPC        人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞     人     少突膠質(zhì)前體細(xì)胞         1640         貼壁

SNU-5       人胃癌細(xì)胞     人     胃癌；女性     1640         懸浮

MiaPaCa-2       人胰腺癌細(xì)胞         人     胰腺導(dǎo)管癌；男性         1640         貼壁

BIU-87      人膀胱癌細(xì)胞         人     膀胱癌；男性         1640         貼壁

KM12        人結(jié)腸癌細(xì)胞         人     結(jié)腸癌     IMDM      貼壁

NP69         人鼻咽上皮細(xì)胞     人     鼻咽；上皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化        1640         貼壁

NCI-H295R       人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞         人     腎上腺皮質(zhì)癌；女性     DMEM     貼壁

Karpas-422       人類(lèi)B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞         人     彌漫大B淋巴瘤；女性         1640         懸浮

HMVEC    人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞     人     肺；微血管；內(nèi)皮細(xì)胞         DMEM     貼壁

HPASMC  人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞     人     肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞         DMEM     貼壁

HK-2          人腎小管上皮細(xì)胞         人     腎小管；上皮細(xì)胞；HPV16轉(zhuǎn)化；男性     DMEM/F12      貼壁

ECA109    人食管癌細(xì)胞         人     食管鱗癌；女性     1640         貼壁

NHDF        正常人皮膚成纖維細(xì)胞         人     皮膚；成纖維細(xì)胞         DMEM     貼壁

LX-2  人肝星形細(xì)胞         人     肝；星形細(xì)胞；男性     1640         貼壁

MM.1S     人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞     人     骨髓瘤；女性         IMDM      懸浮

KYSE270   人食管鱗癌細(xì)胞     人     食管鱗癌；男性     1640         貼壁

TE-10        人食管癌細(xì)胞         人     食管鱗癌；男性     DMEM     貼壁

Nb2  大鼠淋巴瘤細(xì)胞     大鼠         惡性淋巴瘤；雄性；Nb         1640         懸浮

C3H/10T1/2       小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞         小鼠         間充質(zhì)干細(xì)胞；自發(fā)永生；C3H DMDM     貼壁

MSCs        小鼠臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞         小鼠         臍帶；間充質(zhì)干細(xì)胞     DMDM     貼壁

HSC  人雪旺細(xì)胞     人     雪旺細(xì)胞         DMEM     貼壁

HFLS          人滑膜成纖維細(xì)胞         人     滑膜；成纖維細(xì)胞         DMEM     貼壁

S180          小鼠肉瘤瘤株         小鼠         小鼠肉瘤         1640         懸浮現(xiàn)在，由于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在規(guī)模和可靠性方面都不斷發(fā)展，且從中得到的蛋白質(zhì)也被證明是安全有效的，因此人們對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的態(tài)度已經(jīng)發(fā)生了改變。許多人用和獸用的重要蛋白質(zhì)藥物和疫苗，尤其是那些相對(duì)較大、較復(fù)雜或糖基化（glycosylated）的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是的生產(chǎn)方式。60年代初，英國(guó)AVRI研究所在貼壁細(xì)胞系BHK21中將口蹄疫病毒培養(yǎng)成功后，從zui初的200ml和800ml玻璃容器開(kāi)始，很快就放大到30L和100L不銹鋼罐的培養(yǎng)規(guī)模。使用的是基于Eagle's配方的培養(yǎng)基，補(bǔ)充5%成年牛血清和蛋白胨。1967年以后，Wellcome（現(xiàn)為Cooper動(dòng)物保健）集團(tuán)分布于歐洲、非洲和南美洲8個(gè)國(guó)家的生產(chǎn)廠商，應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)工業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)口蹄疫疫苗和獸用狂犬疫苗，已掌握了5000L的細(xì)胞罐大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)。

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