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標題名稱：HCT-8細胞 細胞株培養
細胞名稱 | HCT-8人結腸癌細胞 |
種屬 | 人 |
組織來源 | 結腸癌 |
生長狀態 | 貼壁生長，上皮樣，該細胞角蛋白陽性；表達CEA、堿性磷酸酶。 |
培養條件 | 培養基類型：RPMI1640培養基 FBS: 10%德國SERANA胎牛血清 抗生素：雙抗 培養條件：37℃，CO2: 5% |
傳代方法 | 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態： 如果沒長滿，將培養瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內更換新鮮培養液，繼續培養。 如果細胞已經長滿（約80%-90%）則傳代后繼續培養。 貼壁細胞傳代方法： 1 棄去培養基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。 2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細胞接觸后放入37℃培養箱內，隨時觀察細胞狀態變化，待細胞大部分變圓后加*培養基終止消化。 懸浮細胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。 1 直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。 2離心法傳代是將細胞連同培養液一并轉移到離心管內， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養液到離心管內，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養皿或培養瓶中繼續培養。 一般沒有特殊說明，細胞一般是一傳二。 |
凍存方法 | 70% *培養基，20%FBS，10%DMSO，現用現配。 儲存：液氮中長期保存。 |
注 | 1 觀察細胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計細胞密度。 2 在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養。 3 收到細胞后若發現培養瓶破損、細胞污染等，請在7天內與我們。 |
HCT-8細胞 細胞株培養 （如何預防細胞培養的污染和清除這些污染物呢？）慧穎 細胞庫 技術為您解答：
一、污染的預防
預防是防止細胞培養過程中發生污染的辦法。只有預防工作做在前，才能將發生污染的可能性降到zui小程度。一般預防可從以下幾方面著手：
1-從操作者做起
1操作者責任心要強，要細心穩重，操作技術要熟練。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規定穿隔離衣。進入后關好門，坐下來盡量少走動。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴格檢查器材、溶液和培養物，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大批污染。
2、操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，并將瓶口轉動燒灼。操作時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應轉向背面。
3、操作時要常更換吸管，切勿一根吸管做到底。一旦發現吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去。實驗完畢及時收拾，保持實驗室清潔整齊，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。
2-從物品、用品消毒滅菌著手
細胞培養所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
3-防止細胞交叉污染
在進行多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分，做上標記便于辨別。并按順序進行操作，避免一起進行時易發生混亂。
在進行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細胞培養瓶瓶口，以免把細胞帶到培養液中污染其他細胞。
所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，均應及早留種凍存，一旦發生污染可棄之復蘇，重新培養。
二、污染的清除
培養細胞一經污染，多數較難處理。如果污染細胞價值不大，宜棄之；有細胞株留存的或可購置的，可在尋找原因后*消毒操作室，復蘇或重新購置細胞，再培養。若污染細胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。
1-使用抗生素
抗生素對殺滅細菌較有效。聯合用藥比單獨用藥效果好。預防用藥比污染后再用藥效果好。預防用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL），污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規培養液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青霉素、鏈霉素外，還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環素、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環素處理，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進行治療。近年來有報道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體有效。這三種抗生素均用PBS配成250濃縮液，-20℃保存備用，使用濃度Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。使用時先吸除污染的培養液，加入含BM-1的RPMI1640培養液，3天后再吸除培養液，加入含BM-2的RPMI1640培養液，培養4天，如此連續3個輪次，直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后，再加正常培養液培養傳代3-4次。
2-使用支原體特異性血清
用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經抗血清處理后11天即轉為陰性，并且5個月后仍為陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經濟。
3-加溫處理
將污染的組織培養物放在41℃培養18小時，可殺死支原體，但對細胞有不良影響。所以在處理前要進行預試驗，摸索能zui大限度殺死支原體又對細胞影響zui小的加熱時間。此法有時不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。
4-其他方法
除了上述去除污染的方法外，還有動物體內接種除菌法、巨噬細胞吞噬法、污染培養瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等，但均較麻煩，且效果不確定。所以一旦支原體污染，除非有特別重要價值，一般均棄之重新培養。
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