AB0血型鑒定的注意事項

   ABO血型系統是*個被發現的人類血型系統，是臨床輸血工作中首先要鑒定和輸血前必須進行交叉配血試驗的血型系統。通常利用RBC凝集試驗，通過正反定型準確鑒定ABO血型。

1  ABO血型正反定型及結果

1．1  正定型  用已知抗-A和抗-B分型血清來測定RBC上有無相應的A抗原或／和B抗原。

1．2  反定型  用已知A細胞和B細胞來測定血清中有無相應的抗-A或／和抗-B。

2正反定型注意事項

1. 更換新批號抗血清或對試驗有懷疑時，可設陽性、陰性和自身對照。抗A管的陽性對照用抗A標準血清加已知A型RBC；抗B管的陽性對照用抗B標準血清加已知B型RBC；陰性對照用AB型血清加正常人0型RBC；自身對照用被檢者血清加被檢者RBC。抗血清與5％RBC生理鹽水懸液加入量及操作步驟與正定型試驗相同。判斷結果時，首先看對照管，當陽性對照管陽性，陰性對照管陰性，自身對照管陰性時，測定管的結果才可信。否則必須查找原因。(2)為避免交叉污染，尖吸管、玻棒只能一次性使用。RBC懸液濃度過高或離心力過大可造成假凝集，操作時須注意。操作環境應在20—25℃下進行。操作中心嚴格查對制度，觀察后要立即正確記錄結果。(3)嬰幼兒RBC抗原末發育*，老年體弱者抗原較弱，用試管法鑒定。白血病、惡性腫瘤等嚴重疾病時RBC上的抗原可能減弱甚至消失，要結合反定型綜合判斷結果。亞型RBC(如A3型)的抗原性較弱有時會出現混合外觀，甚至與較低效價的血清抗體不出現凝集反應，要用抗-(A+B)標準血清進行鑒定。(4)被檢RBC異常：如弱A或弱B亞型，白血病時可使A或B抗原減弱而誤定為0型；霍奇金病也有類似白血病的情況，獲得性B或A表現等。(5)有些疾病可能使RBC定型困難。①嚴重腸道細菌感染，其代謝產物使RBC出現類B現象與抗-B血清出現假凝集。②嚴重細菌感染，可激活正常存在于RBC上T抗原，與各型血清中正常存在的抗-T反應，出現全凝集現象。⑦血清中存在病理性冷凝集素與RBC上抗原結合，干擾血型鑒定。④部分高球蛋白和異常高球蛋白血癥患者(如慢性肝病、多發性骨髓瘤)RBC血型鑒定困難，須加做自身血清、RBC對照，自身RBC、生理鹽水懸液對照以及通過反定型，抗體吸收、放散試驗和血型物質型別的鑒定，甚至親屬的血型鑒定等家系調查分析綜合判斷。(6)輸入異型血或做過與受檢者血型不同的異體骨髓器官移植患者，在血型鑒定時可能出現混合外觀。
2. 反定型注意事項    ①不宜用玻片法，因為獻血者或患者血清有時凝集力較弱，必須經過離心使RBC緊密接觸，否則，不足以使RBC凝集。②試管離心后，應先觀察上清液有無溶血，然后搖動底層RBC進行觀察，若出現溶血現象表明存在抗原抗體反應并有補體激活，應視為凝集。因為患者新鮮血清作反定型時，由于補體作用發生溶血，如不檢查有無溶血現象，會使結果判斷錯誤或遺漏。⑦反定型必要時加一管“0"型RBC，用以查出盂買型抗-h抗體，同時可查是否有緡錢狀形成和血清中偶可見到的少數與血型抗原無關但能使陽比發生凝集的物質。④老年人、白血病患者、骨髓移植患者、先天性免疫球蛋白缺陷、長期大量應用免疫抑制劑，血型抗體可減弱或消失，造成反定型困難。⑤血清中存在免疫性血型抗體，冷凝集素效價增高，多發性骨髓瘤免疫球蛋白異常均可造成反定型困難。⑧新生兒、4—6M內嬰兒反定型時，可能不凝集或凝集很弱，且新生兒抗體多來自母親，自身抗體效價又很低，故反定型意義不大。4正反定型結果不一致常見情況    ①分型血清效價太低，親和力不強。如抗-A血清效價不高，可將A型誤定為0型。分型血清未滅活產生溶血，血型鑒定時誤認為陰性。②RBC懸液過濃、過淡，抗原抗體比例不適當，使反應不明顯出現假陰性。③受檢者RBC上抗原位點太少或抗原性減弱以及類B或cisAB等。④受檢者血清中缺乏應有的抗-A、抗-B。⑤各種原因引起的RBC溶解，誤判為不凝集，部分溶血時可溶性血型物質中和了相應的抗體。⑥受檢者血清中蛋白紊亂或實驗室溫度過高，常引起RBC呈緡錢狀排列。⑦細茵污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。⑧血清中有意外抗體如自身抗-I，存在免疫性抗體如抗-PI、抗-M、抗-H等常干擾試驗。⑨新生兒、老年人、低免疫球蛋白血癥患者的血清中的抗-A、抗-B效價太低甚至缺乏，可出現正反定型不一致。⑩非特異性反應：被檢血清中可出現與血型無關的，同部分人血細胞均可發生凝集樣反應的現象，可能系免疫性抗體所致。5  正反定型結果不一致的處理方法    (1)首先重復試驗一次，嚴格操作規程，使用合格的試劑及細心觀察和解釋結果，可解決明顯的問題。(2)另從受檢者采取一份新鮮血標本，可糾正因污染或搞錯標本造成的不符。(3)將RBC洗滌數次，配成5％鹽水細胞懸液，用抗-A、抗-B、抗-A1、抗-(A+B)及抗-H做試驗可以得到其它有用的信息。(4)對受檢者RBC作直接抗人球蛋白試驗，如結果呈陽性，表示RBC已被抗體致敏。(5)用A1、A2、B、0型RBC及自身RBC檢查受檢血清。加懷疑是抗-I，用0型(或ABO相合的)臍血RBC檢查。(6)若試驗結果未見凝集，應將細胞及血清試驗至少在室溫和4℃放置30min，用顯微鏡核實。(7)如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢RBC與抗-A或抗-B血清作吸收及放散試驗以及受檢者唾液作A、B、H血型物質測定。后者只對80％HAB分泌型的人有用。(8)若試驗結果RBC呈緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴混合，往往可使緡錢狀消失。應注意不應先加鹽水1滴于受檢者血清中而后和陽比試驗，以免使血清中抗體被稀釋。(9)如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時，可用下列方法進行鑒定。①觀察細胞與抗-A及抗-B的凝集強度，與抗-A的反應要比抗-B的反應強。這種區別用玻片法作試驗更為明顯。②用受檢者RBC與自身血清試驗，血清中的抗-B不凝集自身RBC上的類B抗原。②檢查唾液中是否有A、B物質，若是分泌型，可檢出A物質而無B物質。④核對患者的診斷，類B抗原的形成與結腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關。⑤如發現多凝集現象，應考慮由遺傳產生的Cad抗原活性，被細菌酶激活的T或TK受體；或產生機制不太明了的Tn受體所引起。可用經過T激活的RBC吸收過(除去抗-T)的抗-A或抗-B血清加以檢查。