細胞名稱：L-02 人肝細胞

種屬：人

組織來源：肝

生長狀態(tài)：貼壁生長

培養(yǎng)條件：

   培養(yǎng)基類型：DMEM 培養(yǎng)基

   FBS: 10% 

   抗生素：雙抗

   培養(yǎng)條件：37℃，CO2: 5%

L-02 人肝細胞傳代方法：

收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)：如果沒長滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞已經(jīng)長滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁細胞傳代方法：

1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時觀察細胞狀態(tài)變化，待細胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

懸浮細胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。

1 直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

2離心法傳代是將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

一般沒有特殊說明，細胞一般是一傳二。

凍存方法：70% *培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

        儲存：液氮中長期保存。

L-02 人肝細胞說明：

1 觀察細胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計細胞密度。

2 在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發(fā)生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3 收到細胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細胞污染等，請在一周內(nèi)與我們。

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