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ELISA基本概念原理和操作

發(fā)布時(shí)間:2012-09-10瀏覽:2917次

  ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,ELISA試劑盒每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,豬ELISA試劑盒從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。禽ELISA試劑盒在實(shí)際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計(jì),具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法ELISA試劑盒價(jià)格以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。白介素ELISA試劑盒比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。    

  ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。上海ELISA試劑盒此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

  方法一:用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:

  1. 包被:用0.05M PH9,碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

  3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。

  5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,上海ELISA試劑盒則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

  方法二:用于檢測(cè)未知抗體的間接法:

  用包被緩沖液ELISA試劑盒將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),豬ELISA試劑盒洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,ELISA試劑盒價(jià)格加入新鮮稀釋的酶標(biāo)禽ELISA試劑盒第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30~60分鐘,洗滌,白介素ELISA試劑盒zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
    

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