M059K 細胞株復蘇失敗原因分析

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產品名稱：M059K 細胞

中文名稱：人膠質瘤細胞

種屬：人

來源：膠質瘤；男性

培養條件：EMEM

生長狀態：貼壁

M059K 細胞株復蘇失敗原因分析

大規模培養技術應用簡介

通過大規模體外培養技術培養哺乳類動物細胞是生產生物制品的有效方法。20世界60-70年代，就已創立了可用于大規模培養動物細胞的微載體培養系統和中空纖維細胞培養技術。近十數年來，由于人類對生長激素、干擾素、單克隆抗體、疫苗及白細胞介素等生物制品的需求猛增，以傳統的生物化學技術從動物組織獲取生物制品已遠遠不能滿足這一需求。隨著細胞培養的原理與方法日臻完善，動物細胞大規模培養技術趨于成熟。

所謂動物細胞大規模培養技術（large-scale culture technology）是指在人工條件下（設定ph、溫度、溶氧等），在細胞生物反應器（bioreactor）中高密度大量培養動物細胞用于生產生物制品的技術。目前可大規模培養的動物細胞有雞胚、豬腎、猴腎、地鼠腎等多種原代細胞及人二倍體細胞、cho（中華倉鼠卵巢）細胞、BHK-21(倉鼠腎細胞)、Vero細胞(非洲綠猴腎傳代細胞，是貼壁依賴的成纖維細胞)等，并已成功生產了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅細胞生成素、單克隆抗體等產品。

在過去幾十年來，該技術經有了很大發展，從使用轉瓶(roller bottle) 、CellCube等貼壁細胞培養，發展為生物反應器（Bioreactor）進行大規模細胞培養。*代細胞培養技術核心問題是難以產業化或者說是規模化生產：一是在工藝生產時不能大規模制備產品；二是非批量生產容易導致產品質量的不均一性；三是難以對同批生產進行生產和質量控制。

隨著生物技術的發展，迫切需要大規模的細胞培養，特別是培養表達特異性蛋白的哺乳動物細胞，以便獲得大量有用的細胞表達產物。采用玻璃瓶靜置或旋轉瓶的培養方法，已不能滿足所需細胞數量及其分泌產物。因而必須為工業化生產開創一種新的技術方法。自70年代以來，細胞培養用生物反應器有很大的發展，種類越來越多，規模越來越大，較常見的細胞培養生物反應器有空氣提升反應器，中空纖維管反應器，無泡攪拌反應器及籃式生物反應器等。八十年代以來，人們逐漸開始以生物反應器培養代替鼠腹水的方法獲得單克隆抗體。

動物細胞是一種無細胞壁的真核細胞，生長緩慢，對培養環境十分敏感。采用傳統的生物化工技術進行動物細胞大量培養，除了要滿足培養過程必需的營養要求外，有必要建立合理的控制模型，進行pH和溶氧（DO）的*控制。細胞生物反應器可通過微機有序地定量地控制加入動物細胞培養罐內的空氣、氧氣、氮氣和二氧化碳四種氣體的流量，使其保持*的比例來控制細胞培養液中的pH值和溶氧水平，使系統始終處于*狀態，以滿足動物細胞的生長對pH值和溶解氧的需要。如為提高或達到一定的溶氧水平可改變通入培養罐內氣體中氧氣和氮氣的比例來實現控制DO值的目的。采用二氧化碳/碳酸氫鈉（CO2/NaHCO3）緩沖液系統來控制培養液的pH值是一種較好的方法。

M059K 細胞株復蘇失敗原因分析

Farage      人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞         人     彌漫大B淋巴瘤；淋巴結轉移；女性         1640         懸浮

OCI-LY3    人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞         人     彌漫大B淋巴瘤；男性         1640         懸浮

3D4/21      豬肺泡巨噬細胞     豬     肺泡巨噬細胞；SV40轉化；Landrace          DMEM     貼壁

HEEpiC     人食管上皮細胞     人     食管；上皮細胞     1640         貼壁

CP70         人卵巢癌細胞         人     卵巢癌；女性         1640         貼壁

KYSE450   人食管癌細胞         人     食管鱗癌；男性     EMEM      貼壁

BNL1MEA.7R.1        小鼠肝上皮細胞     小鼠         肝；上皮細胞         1640         貼壁

HCC-78    人肺腺癌細胞        人     肺腺癌；男性         EMEM      貼壁

SHEE         永生化食管上皮細胞     人     食管；上皮細胞     1640         貼壁

ECV304    人臍靜脈內皮（膀胱癌）細胞     人     膀胱癌     1640         貼壁

HM  人小神經膠質細胞         人     小神經膠質細胞     DMEM     貼壁

CTV-1        人急性T淋巴細胞白血病細胞     人     急性T淋巴細胞白血病；男性     1640         懸浮

GDM-1     人急性粒細胞白血病細胞     人     急性粒細胞白血病；女性     IMDM      懸浮

DOhh2      人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞         人     人彌漫大B淋巴瘤；男性     1640         懸浮

HBE 人支氣管上皮細胞         人     支氣管；上皮細胞         DMEM     貼壁

LADMAC  小鼠骨髓淋巴細胞         人     骨髓淋巴細胞；C3H      DMEM     懸浮

EOC20      小鼠小膠質細胞     小鼠         小膠質細胞； C3H/HeJ         DMEM     貼壁

A2058       人黑色素瘤細胞     人     黑色素瘤；淋巴結轉移；男性     DMEM     貼壁

BMSCs     小鼠骨髓間充質干細胞         小鼠         骨髓間充質干細胞         DMDM     貼壁

HuCCT1   人肝內膽管癌細胞         人     肝內膽管癌；男性         DMEM     貼壁

huh28       人膽管癌細胞         人     肝內膽管癌     1640         貼壁

TE354T     人皮膚基底細胞癌細胞        人     皮膚基底細胞癌；女性         DMEM     貼壁

NCI-H820          人乳頭狀肺腺癌細胞     人     乳頭狀肺腺癌；淋巴結轉移；男性     1640         貼壁

CAOV-3    人卵巢腺癌細胞     人     卵巢癌；女性         DMEM     貼壁

HSMC       人骨骼肌細胞         人     骨骼肌     DMEM     貼壁

VSMC       大鼠胸主動脈平滑肌細胞     大鼠         胸主動脈平滑肌     DMEM     貼壁

SNU398    人肝癌細胞     人     肝癌；男性     DMEM     貼壁+懸浮

CCC-HHM-2     人胚心肌組織來源細胞         人     心肌         DMEM     貼壁

HCFB        人心肌成纖維細胞         人     心肌；成纖維細胞         DMEM     貼壁

CCC-HEH-2       人胚心肌組織來源細胞         人     心肌         DMEM     貼壁

MT2 人T淋巴細胞白血病細胞     人     T淋巴細胞白血病 1640         懸浮

HMSC       人骨髓間充質干細胞     人     骨髓間充質干細胞         McCoy’s    貼壁

HL-1 小鼠心房肌細胞     小鼠         心肌；SV40轉化    DMEM     貼壁

TU212      人喉癌細胞     人     頭頸鱗癌         1640         貼壁

SNU-C1    人結腸癌細胞         人     結腸癌；男性         1640         貼壁

HSF  人皮膚成纖維細胞         人     皮膚；成纖維細胞         DMEM     貼壁

M-20         人胚胎皮膚細胞     人     黑色素瘤         DMEM     貼壁

HNEpC     人鼻粘膜上皮細胞         人     鼻粘膜；上皮細胞         1640         貼壁

HFTF         人胚胎眼Tenon's囊成纖維細胞        人     胚胎；眼；成纖維細胞         DMEM     貼壁

MSC 豬骨髓間質干細胞         豬     骨髓間質干細胞     1640         貼壁

SJSA-1       人骨肉瘤細胞         人     骨肉瘤；男性         DMEM     貼壁

MC38       小鼠結腸癌細胞     小鼠         結腸癌；雌性；C57BL/6        1640         貼壁

MeT-    人膜膜間皮細胞     人     膜膜間皮細胞；SV40轉化；男性        DMEM     貼壁

Mousepodocyte       小鼠腎足細胞         小鼠         腎；足細胞     DMEM     貼壁

Ratpodocyte    大鼠腎足細胞         大鼠         腎；足細胞     DMEM     貼壁

         兔軟骨細胞     兔     軟骨         DMEM     貼壁

HCM         人心肌細胞     人   心肌         DMEM     貼壁

SU-DHL-6 人彌漫大B淋巴瘤細胞         人     彌漫大B淋巴瘤；腹腔轉移；男性     1640         懸浮

RC-K8       人彌漫大B淋巴瘤細胞         人     彌漫大B淋巴瘤；腹腔轉移；男性     1640         懸浮

NCI-H929          人骨髓瘤細胞         人     骨髓瘤；女性         IMDM      懸浮

RT-112      人膀胱癌細胞         人     膀胱癌；女性         1640         貼壁

HCCLM3  人高轉移肝癌細胞         人     肝癌；男性     DMEM     貼壁

SACC-83   涎腺腺樣囊性癌細胞     人     涎腺腺樣囊性癌     1640         貼壁

SACC-LM 涎腺腺樣囊性癌細胞     人     涎腺腺樣囊性癌     1640         貼壁

Malme-3M       人惡性黑色素瘤細胞     人     黑色素瘤；肺轉移；男性     DMEM     貼壁

HCV-29     人膀胱上皮細胞     人     膀胱癌；男性         1640         貼壁

McA-RH7777   大鼠肝癌細胞         大鼠         肝癌；雌性；Buffalo     DMEM     貼壁

HOPC        人少突膠質前體細胞     人     少突膠質前體細胞         1640         貼壁

SNU-5       人胃癌細胞     人     胃癌；女性     1640         懸浮

MiaPaCa-2       人胰腺癌細胞         人     胰腺導管癌；男性         1640         貼壁

BIU-87      人膀胱癌細胞         人     膀胱癌；男性         1640         貼壁

KM12        人結腸癌細胞         人     結腸癌     IMDM      貼壁

NP69         人鼻咽上皮細胞     人     鼻咽；上皮細胞；SV40轉化        1640         貼壁

NCI-H295R       人腎上腺皮質腺癌細胞         人     腎上腺皮質癌；女性     DMEM     貼壁

Karpas-422       人類B細胞非霍奇金淋巴瘤細胞         人     彌漫大B淋巴瘤；女性         1640         懸浮

HMVEC    人肺微血管內皮細胞     人     肺；微血管；內皮細胞         DMEM     貼壁

HPASMC  人肺動脈平滑肌細胞     人     肺動脈平滑肌細胞         DMEM     貼壁

HK-2          人腎小管上皮細胞         人     腎小管；上皮細胞；HPV16轉化；男性     DMEM/F12      貼壁

ECA109    人食管癌細胞         人     食管鱗癌；女性     1640         貼壁

NHDF        正常人皮膚成纖維細胞         人     皮膚；成纖維細胞         DMEM     貼壁

LX-2  人肝星形細胞         人     肝；星形細胞；男性     1640         貼壁

MM.1S     人多發性骨髓瘤細胞     人     骨髓瘤；女性         IMDM      懸浮

KYSE270   人食管鱗癌細胞     人     食管鱗癌；男性     1640         貼壁

TE-10        人食管癌細胞         人     食管鱗癌；男性     DMEM     貼壁

Nb2  大鼠淋巴瘤細胞     大鼠         惡性淋巴瘤；雄性；Nb         1640         懸浮

C3H/10T1/2       小鼠間充質干細胞         小鼠         間充質干細胞；自發永生；C3H DMDM     貼壁

MSCs        小鼠臍帶間充質干細胞         小鼠         臍帶；間充質干細胞     DMDM     貼壁

HSC  人雪旺細胞     人     雪旺細胞         DMEM     貼壁

HFLS          人滑膜成纖維細胞         人     滑膜；成纖維細胞         DMEM     貼壁

S180          小鼠肉瘤瘤株         小鼠         小鼠肉瘤         1640         懸浮現在，由于動物細胞培養技術在規模和可靠性方面都不斷發展，且從中得到的蛋白質也被證明是安全有效的，因此人們對動物細胞培養的態度已經發生了改變。許多人用和獸用的重要蛋白質藥物和疫苗，尤其是那些相對較大、較復雜或糖基化（glycosylated）的蛋白質來說，動物細胞培養是的生產方式。60年代初，英國AVRI研究所在貼壁細胞系BHK21中將口蹄疫病毒培養成功后，從zui初的200ml和800ml玻璃容器開始，很快就放大到30L和100L不銹鋼罐的培養規模。使用的是基于Eagle's配方的培養基，補充5%成年牛血清和蛋白胨。1967年以后，Wellcome（現為Cooper動物保健）集團分布于歐洲、非洲和南美洲8個國家的生產廠商，應用此項技術工業規模化生產口蹄疫疫苗和獸用狂犬疫苗，已掌握了5000L的細胞罐大規模培養技術。

M059K 細胞株復蘇失敗原因分析