293T細胞之正確轉(zhuǎn)染

產(chǎn)品名稱：293T細胞

中文名稱：人胚腎細胞

種屬：人

來源：胚腎；5型腺病毒及SV40轉(zhuǎn)化；女性

培養(yǎng)條件：DMEM/F12 +10%胎牛血清

生長狀態(tài)：貼壁生長

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293T細胞之正確轉(zhuǎn)染

常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（*轉(zhuǎn)染）和瞬時轉(zhuǎn)染兩類。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA 既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。瞬時轉(zhuǎn)染則指外源DNA/RNA 不整合到宿主染色體中，一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。

轉(zhuǎn)染方法不同，對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響很大。常見的轉(zhuǎn)染方法有：

1. 磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA 復合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞原理得到瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果，操作簡便但重復性差，不可用于原代細胞的轉(zhuǎn)染。

2. DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內(nèi)吞，可用于瞬時轉(zhuǎn)染，方法相對簡便、結(jié)果可重復但對細胞有一定的毒副作用。

3. 電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染均適用。適用性廣但細胞致死率高，DNA 和細胞用量大， 需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件。

4. 病毒介導法：通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中。適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等。

5. 陽離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞從而形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時性轉(zhuǎn)。該方法適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大。

6. 顯微注射法：用顯微操作將DNA 直接注入靶細胞核，適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞。

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