人子宮頸表皮癌細(xì)胞相關(guān)培養(yǎng)

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人子宮頸表皮癌細(xì)胞相關(guān)培養(yǎng)

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人子宮頸表皮癌細(xì)胞相關(guān)培養(yǎng)

細(xì)胞因子(cytokine，CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì)，具有調(diào)節(jié)固有免疫 和適應(yīng)性免疫 、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)以及損傷組織修復(fù)等多種功能。細(xì)胞因子可被分為白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子等。眾多細(xì)胞因子在體內(nèi)通過(guò)旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌等方式發(fā)揮作用，具有多效性、重疊性、拮抗性、協(xié)同性等多種生理特性，形成了十分復(fù)雜的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，參與人體多種重要的生理功能。細(xì)胞因子的作用方式

重組細(xì)胞因子要求:

1. 真實(shí)性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過(guò)N末端氨基酸序列分析;必要時(shí)應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測(cè)其真實(shí)性。

2. 純度:應(yīng)用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產(chǎn)品純度。

3. 生物活性:進(jìn)行相應(yīng)的體外(in vitro)或體內(nèi)(in vivo)活性檢測(cè)。

4. 蛋白含量:通過(guò)紫外光譜分析，SDS-PAGE電泳檢測(cè);必要時(shí)應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。

5. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測(cè)內(nèi)毒素。

6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過(guò)濾除菌處理。

重組細(xì)胞因子的狀態(tài):

市場(chǎng)上主流的重組蛋白產(chǎn)品，多在不含載體蛋白或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等)的條件下，以低鹽的形式做凍干處理，因此微量(多以微克計(jì)量)的細(xì)胞因子在凍干過(guò)程中會(huì)沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層，所以建議在收到試劑后，務(wù)必于開蓋前先離心20-30秒，使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于凍干館的底部(此時(shí)能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象)。

 (一)根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞種類不同分類

1.淋巴因子(lymphokine) 于命名，主要由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞等。重要的淋巴因子有IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-14、IFN-γ、TNF-β、GM-CSF和神經(jīng)白細(xì)胞素等。2.單核因子(monokine) 主要由單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、G-CSF和M-CSF等3.非淋巴細(xì)胞、非單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子 主要由骨髓和胸腺中的基質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等細(xì)胞產(chǎn)生，如EPO、IL-7、IL-11、SCF、內(nèi)皮細(xì)胞源性IL-8和IFN-β等。

(二)根據(jù)細(xì)胞因子主要的功能不同分類

1.白細(xì)胞介素(interleukin, IL) 1979年開始命名。由淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞或其它非單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，在細(xì)胞間相互作用、免疫調(diào)節(jié)、造血以及炎癥過(guò)程中起重要調(diào)節(jié)作用，凡命名的白細(xì)胞介素的cDNA基因克隆和表達(dá)均已成功，已報(bào)道有三十余種(IL-1―IL-38)。2.集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF) 根據(jù)不同細(xì)胞因子刺激造血干細(xì)胞或分化不同階段的造血細(xì)胞在半固體培養(yǎng)基中形成不同的細(xì)胞集落，分別命名為G(粒細(xì)胞)-CSF、M(巨噬細(xì)胞)-CSF、GM(粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)-CSF、Multi(多重)-CSF(IL-3)、SCF、EPO等。不同CSF不僅可刺激不同發(fā)育階段的造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞增殖的分化，還可促進(jìn)成熟細(xì)胞的功能。3.干擾素(interferon, IFN) 1957年發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，zui初發(fā)現(xiàn)某一種病毒感染的細(xì)胞能產(chǎn)生一種物質(zhì)可干擾另一種病毒的感染和復(fù)制，因此而得名。根據(jù)干擾素產(chǎn)生的來(lái)源和結(jié)構(gòu)不同，可分為IFN-α、IFN-β和IFN-γ，他們分別由白細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和活化T細(xì)胞所產(chǎn)生。各種不同的IFN生物學(xué)活性基本相同，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等作用。4.腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF) zui初發(fā)現(xiàn)這種物質(zhì)能造成腫瘤組織壞死而得名。根據(jù)其產(chǎn)生來(lái)源和結(jié)構(gòu)不同，可分為TNF-α和TNF-β兩類，前者由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，后者由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，又名淋巴毒素(lymphotoxin, LT)。兩類TNF基本的生物學(xué)活性相似，除具有殺傷腫瘤細(xì)胞外，還有免疫調(diào)節(jié)、參與發(fā)熱和炎癥的發(fā)生。大劑量TNF-α可引起惡液質(zhì)，因而TNF-α又稱惡液質(zhì)素(cachectin)。5.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β家族(transforming growth factor-β family, TGF-β family) 由多種細(xì)胞產(chǎn)生，主要包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGFβ1β2以及骨形成蛋白(BMP)等。6.生長(zhǎng)因子(growth factor,GF)如表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、血小板衍生的生長(zhǎng)因子(PDGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-I(IGF-1)、IGF-Ⅱ、白血病抑制因子(LIF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、抑瘤素M(OSM)、血小板衍生的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(PDECGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(TGF-α)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)等。7.趨化因子家族(chemokinefamily) 包括四個(gè)亞族:(1)C-X-C/α亞族，主要趨化中性粒細(xì)胞，主要的成員有IL-8、黑素瘤細(xì)胞生激活性(GRO/MGSA)、血小板因子-4(PF-4)、血小板堿性蛋白、蛋白水解來(lái)源的產(chǎn)物CTAP-Ⅲ和β-thromboglobulin、炎癥蛋白10(IP-10)、ENA-78;(2)C-C/β亞族，主要趨化單核細(xì)胞，這個(gè)亞族的成員包括巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1α(MIP-1α)、MIP-1β、RANTES、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1/MCAF)、MCP-2、MCP-3和I-309。(3)C型亞家族的代表有淋巴細(xì)胞趨化蛋白。(4)CX3C亞家族，Fractalkine是CX3C型趨化因子，對(duì)單核-巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞及NK細(xì)胞有趨化作用。

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